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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

小鼠牙乳頭分離自牙乳頭組織；牙乳頭細(xì)胞來源于外胚間充質(zhì)，具有多向分化潛能，是體內(nèi)分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞的前體細(xì)胞，該細(xì)胞在牙發(fā)育和牙體牙髓損傷修復(fù)過程中起重要作用。牙乳頭細(xì)胞為未分化的間充質(zhì)細(xì)胞，有少量微細(xì)的膠原纖維分散在細(xì)胞外間隙。在鐘狀期，被成釉器凹陷部包圍的外胚間葉組織增多，并出現(xiàn)細(xì)胞的分化。在內(nèi)釉上皮的誘導(dǎo)下，牙乳頭外層細(xì)胞分化為高柱狀的成牙本質(zhì)細(xì)胞。這些細(xì)胞在切緣或牙尖部為柱狀，在牙頸部細(xì)胞尚未分化成熟，為立方狀。牙乳頭在牙發(fā)育中有重要作用?，F(xiàn)已證明，牙乳頭是決定牙形狀的重要因索。例如，將切牙的成釉器與磨牙的牙乳頭重新組合，結(jié)果形成磨牙；與此相反，切牙的牙乳頭與磨牙成釉器重新組合，結(jié)果形成切牙。牙乳頭還可以誘導(dǎo)非牙源性的口腔上皮形成成釉器。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠牙乳頭采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠牙乳頭經(jīng)DMP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠層連蛋白/板層素(LN)檢測試劑盒 ，英文名： LN ELISA Kit

Mouse N- acetyl - seryl - aspayl -- lysyl - proline (AcSDK 小鼠N-乙?；?span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯(AcSDK

ELISA 小鼠雙鏈DNA(mouse dsDNA)  進口分裝

CLIAKitforLC1(Humanai-livercytosolaibodytype1)ELISAKit人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體

通用型vero毒素大腸桿菌志賀氏毒素-1(VTEC-Shigatoxin1)試劑盒20次

ELISAKitBV猴B病毒

THOP1重組小鼠 THOP1 蛋白 Protein

S100鈣結(jié)合蛋白(S100)重組蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein (S100)

KLRK1重組人 NKG2D / CD314 蛋白 (aa 78-216, His 標(biāo)簽) Protein

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白

防御素β103B(DEFβ103B)重組蛋白 Recombinant Defensin Beta 103B (DEFB103B)

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

FIGF重組小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 Protein

IGFBP1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP1 蛋白

BIRC5重組人 Survivin / BIRC5 / API4 蛋白 Protein

小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heat shock protein 40 (HSP-40) ELISA Kit 人熱休克蛋白40(HSP-40)檢測試劑盒

HumanEuglobulinLysis,ELELISAKit 人優(yōu)球蛋白(EL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAngiopoietin1,ANG-1檢測試劑盒人血管生成素1(ANG-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物脯(proline)含量比色法定量檢測試劑盒20次

LHELISAKit魚促黃體激素(LH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠牙乳頭細(xì)胞小鼠骨成型蛋白7   英文名稱：   Mouse Bone Morphogenetic Protein 7   規(guī)格：      英文縮寫：   BMP7

小鼠B淋巴細(xì)胞刺激因子   英文名稱：   B lymphocyte stimulator   規(guī)格：      英文縮寫：   BAFF

小鼠凋亡因子BAX   英文名稱：   apoptogen BAX   規(guī)格：      英文縮寫：   BAX

小鼠細(xì)胞凋亡相關(guān)基因BCL-2   英文名稱：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   規(guī)格：      英文縮寫：   BCL-2