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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠牙胚分離自牙胚組織；牙胚是牙齒開(kāi)始發(fā)育階段的形態(tài)，是由牙板向深層的結(jié)締組織內(nèi)伸延，在其末端細(xì)胞增生，進(jìn)一步發(fā)育成牙胚。牙胚有三部分組成：①成釉器（enamel organ），起源于口腔外胚層，形成釉質(zhì)；②牙乳頭（dental papilla），起源于外胚層間充質(zhì)，形成牙髓和牙本質(zhì)；③牙囊（dental sac），起源于外胚層間充質(zhì)，形成牙骨質(zhì)、牙周膜和固有牙槽骨。牙胚的發(fā)生是口腔上皮和外胚間充質(zhì)相互作用的結(jié)果。在胚胎的第5周，覆蓋在原口腔的上皮由兩層細(xì)胞組成，外層是扁平上皮細(xì)胞，內(nèi)層為矮柱狀的基底細(xì)胞。在未來(lái)的牙槽突區(qū)，深層的外胚層間充組織誘導(dǎo)上皮增生，開(kāi)始僅在上下頜弓的特定點(diǎn)上，上皮局部增生，很快增厚的上皮相互連接，依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶，稱為原發(fā)性上皮帶。在胚胎的第7周，這一上皮帶繼續(xù)向深層生長(zhǎng)，并分裂為兩個(gè)：向頰（唇）方向生長(zhǎng)的上皮板稱前庭板，位于舌（腭）側(cè)的上皮板稱為牙板（dental lamina）。在胚胎的第8-10周，前庭板繼續(xù)向深層生長(zhǎng)，與發(fā)育的牙槽嵴分開(kāi)，前庭板表面上皮變性，形成口腔前庭溝。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠牙胚采用膠原酶消化法制備而來(lái)制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠牙胚經(jīng)檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠牙胚體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠層粘蛋白α1(LAMA1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： LAMA1 ELISA Kit

Mouse N- acetyl beta -D- Glucosaminidase (NAG) ELISA Kit 小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠(mouse Cytochrome C)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLCA/CD45(Humanleukocytecommonaigen)ELISAKit人白細(xì)胞共同抗原

通用型RNA酶保護(hù)法檢測(cè)試劑盒5次

ELISAKitE-Selectin/CD62E猴E選擇素

ENSA重組人 ENSA / Endosulfine alpha 蛋白 Protein

SOD2 (superoxide-dimutase-2 0.5mlSOD2 (superoxide-dimutase-2) 超氧化物歧化酶2抗原

DDR1重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 Protein

DRAXIN Protein Human 重組人 DRAXIN 蛋白

PDGFRA Protein Human 重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白

SOD2 (superoxide-dimutase-2 0.5mlSOD2 (superoxide-dimutase-2) 超氧化物歧化酶2抗原

DRAXIN Protein Human 重組人 DRAXIN 蛋白

ENSA重組人 ENSA / Endosulfine alpha 蛋白 Protein

PDGFRA Protein Human 重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白

DDR1重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 Protein

小鼠抗受體(A)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heat shock protein 27 (HSP-27) ELISA Kit 人熱休克蛋白27(HSP-27)檢測(cè)試劑盒

Humanfreehaemoglobin,f-HbELISAKit 人游離血紅蛋白(f-Hb)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAngiogenin,ANG檢測(cè)試劑盒人血管生長(zhǎng)素(ANG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物非蛋白/游離巰基含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

MacrobrachiumrosenbergiiNodavirus,MrNVELISAKit羅氏沼蝦諾達(dá)病毒(MrNV)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠牙胚細(xì)胞小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。