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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠皮層神經(jīng)元分離自腦皮層組織；皮層神經(jīng)元細(xì)胞是構(gòu)成中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長(zhǎng)突觸(軸突)的細(xì)胞，它由細(xì)胞體和細(xì)胞突起構(gòu)成。在長(zhǎng)的軸突上套有一層鞘，組成神經(jīng)纖維，它的末端的細(xì)小分支叫做神經(jīng)末梢。細(xì)胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中，細(xì)胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細(xì)胞體是細(xì)胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細(xì)胞中央，染色質(zhì)少，核仁明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì)，還有許多神經(jīng)元纖維。細(xì)胞突起是由細(xì)胞體延伸出來(lái)的細(xì)長(zhǎng)部分，又可分為樹(shù)突和軸突。每個(gè)神經(jīng)元可以有一或多個(gè)樹(shù)突，可以接受刺激并將興奮傳入細(xì)胞體。每個(gè)神經(jīng)元只有一個(gè)軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個(gè)神經(jīng)元或其他組織，如肌肉或腺體。皮質(zhì)神經(jīng)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細(xì)胞之一，是大腦進(jìn)行功能活動(dòng)調(diào)節(jié)的基本單位，參與動(dòng)物多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過(guò)程。通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察顯示神經(jīng)元從貼壁、伸出突起開(kāi)始；突起逐漸增多，而后突起進(jìn)一步增多并逐漸成網(wǎng)，同時(shí)細(xì)胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細(xì)胞為豐滿，隨后神經(jīng)元開(kāi)始裂解，突起逐漸減少，細(xì)胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細(xì)胞變形。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠皮層神經(jīng)元采用消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠皮層神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠內(nèi)向整流型離子通道亞家族J成員5(KCNJ5)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： KCNJ5 ELISA Kit

Mouse platelet derived growth factor AB (PDGF-AB) ELISA Kit 小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)檢測(cè)試劑盒

Ratai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISAKit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGL3(HumanGlucoseanspoer3)ELISAKit人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3

細(xì)胞分泌型堿性0酸酶化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒20次

RatStemcellfactor/mastcellgrowthfactor,SCF/MGFELISAKit大鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CDH1重組大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

CTn1 (cardiac troponin 1 0.5mgCTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白

XRCC5 & XRCC6重組人 XRCC5 & XRCC6 Heterodimer 蛋白 Protein

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白

PLAUR Protein Mouse 重組小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白

CTn1 (cardiac troponin 1 0.5mgCTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白

CDH1重組大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

PLAUR Protein Mouse 重組小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白

XRCC5 & XRCC6重組人 XRCC5 & XRCC6 Heterodimer 蛋白 Protein

小鼠瘤病毒16(HPV-16)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Human endothelial lipase (EL) ELISA Kit 人內(nèi)皮脂肪酶(EL)檢測(cè)試劑盒

Humansreumalbumin,HSAELISAKit 人血清白蛋白(HSA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapigfollicle-stimulatinghormone,FSH檢測(cè)試劑盒豚鼠促卵泡素(FSH)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母同還原酶(aldo-ketoreductase)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseCholecystokinin,CCKELISAKit小鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞小鼠巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(mouse MDC)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠髓過(guò)氧化物酶(mouse MPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠肌肉生成抑制素(mouse Myostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝