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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠滑膜成纖維細(xì)胞

英文名稱(chēng)：Mouse Synovial Fibroblast Cells

組織來(lái)源：滑膜

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠滑膜成纖維分離自滑膜組織；滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu)，各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會(huì)累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎(OA)以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P(guān)節(jié)的各個(gè)組成部分，但絕不僅局限于軟骨，還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響，相互作用，共同加速關(guān)節(jié)的退變。滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的大細(xì)胞群體，是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，它包埋在顆粒狀無(wú)定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布。滑膜由A型(巨噬樣滑膜細(xì)胞)、B型(成纖維樣滑膜細(xì)胞)以及C型(樹(shù)突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞)細(xì)胞組成。滑膜細(xì)胞主要功能：①滑膜細(xì)胞產(chǎn)生潤(rùn)滑液成分，并且與關(guān)節(jié)腔的吸收和血液/潤(rùn)滑液交換有關(guān)；②滑膜細(xì)胞增生，表現(xiàn)為不依賴(lài)于支持物生長(zhǎng)，并且分泌大量的效應(yīng)分子來(lái)促進(jìn)炎癥和關(guān)節(jié)損壞；③是自身自分泌和旁分泌網(wǎng)絡(luò)中效應(yīng)因子的一部分。

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠滑膜成纖維采用混合酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠滑膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠滑膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>)   48T

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸試劑盒   48T

豬乙型腦病毒(JEV)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>)   48T

豬乙型腦病毒(JEV)核酸試劑盒(-PCR法)   48T

豬血栓素A2(TXA2)試劑盒

Human tendon protein R (TN-R) ELISA Kit 人肌腱蛋白R(TN-R)試劑盒

Rabbitadrenomedullin,ADMELISAKit 兔子腎上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforai-toxIgM(Humanai-toxoplasmaIgGaibody)ELISAKit人抗弓形體IgM抗體

血小板因子4(PlateletFactorIV)活性比色法定量試劑盒20次

Porcineiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit豬細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒

TIMP1重組小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 蛋白 Protein

BOb-1(B-cell oct-binding protein 1 0.5mgBOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原

ASGR1重組人 ASGPR1 / ASGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BLNK Protein Human 重組人 BLNK / Ly-57 / SLP-65 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CLEC4F Protein Rat 重組大鼠 CLEC4F / CLECSF13 蛋白

BOb-1(B-cell oct-binding protein 1 0.5mgBOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原

BLNK Protein Human 重組人 BLNK / Ly-57 / SLP-65 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TIMP1重組小鼠 TIMP1 / TIMP / CLGI 蛋白 Protein

CLEC4F Protein Rat 重組大鼠 CLEC4F / CLECSF13 蛋白

ASGR1重組人 ASGPR1 / ASGR1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠滑膜成纖維細(xì)胞大鼠谷酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)試劑盒 ，英文名： GAD-Ab-IgM ELISA Kit

Rabbit ierleukin 9 (IL-9) ELISA Kit 兔子白介素9(IL-9)試劑盒

粘附性大腸桿菌(EAEC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitformIgM(HumanmembraneIgM)ELISAKit人表面膜免疫球蛋白M

體液賴(lài)(lysine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次

ELISAKitAE禽腦脊髓

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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