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細胞簡介：

兔淋巴血管內(nèi)皮分離自淋巴血管組織；淋巴管由毛細淋巴管匯合而成。其形態(tài)結(jié)構(gòu)與靜脈相似，但管徑較細，管壁較薄，瓣膜較多且發(fā)達，外形呈串珠狀。淋巴管根據(jù)其位置分為淺、深二種。它們管位于皮下，常與淺靜脈伴行，收集皮膚和皮下組織的淋巴。深淋巴管與深部血管伴行，收集肌肉和內(nèi)臟的淋巴。淺、深淋巴管之間有廣泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常經(jīng)過一個或多個淋巴結(jié)，從而把淋巴細胞帶入淋巴液。主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細胞和漿細胞，參與機體的免疫反應(yīng)。當(dāng)局部感染時，細菌、病毒或癌細胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結(jié)腫大。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴散和轉(zhuǎn)移。淋巴管內(nèi)皮細胞（LEC）是襯覆于淋巴管內(nèi)表面的一種單層扁平上皮，是構(gòu)成淋巴管壁的主要結(jié)構(gòu)，參與維持體液平衡，調(diào)節(jié)淋巴細胞再循環(huán)和機體的免疫反應(yīng)和組織液及蛋白質(zhì)的運輸，在疾病過程中也起著重要作用。近年研究表明，LEC還在傷口愈合、淋巴管水腫和炎癥擴散等病理過程中起重要作用，而且與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。淋巴管內(nèi)皮細胞主要功能：①調(diào)節(jié)體液、蛋白和組織壓力平衡；②為免疫系統(tǒng)的重要組成部分。淋巴管內(nèi)皮細胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴結(jié)核。

方法簡介：

實驗室分離的兔淋巴血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔淋巴血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔淋巴血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠顆粒酶M(GZMM)檢測試劑盒 ，英文名： GZMM ELISA Kit

Monkey endotoxin (ET) ELISA Kit內(nèi)毒素(ET)檢測試劑盒

Ratmyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFSHPoulyELISAKitFSH禽類酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

細胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE)總活性比色法定量檢測試劑盒20次

RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

AXL重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 組織蛋白酶B抗原

BCAM重組人 BCAM 蛋白 Protein

IGSF3 Protein Human 重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

SPN Protein Rat 重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 組織蛋白酶B抗原

IGSF3 Protein Human 重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

AXL重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

SPN Protein Rat 重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

BCAM重組人 BCAM 蛋白 Protein

豚鼠血紅蛋白(HB)檢測試劑盒 ，英文名： HB ELISA Kit

Human secretory compone (SC) ELISA Kit 人分泌成分(SC)檢測試劑盒

rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBcl-2(HumanB-cellleukemia/lymphoma2)ELISAKit人B細胞淋巴瘤因子2

纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物(PAI)活性比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit兔子補體片斷3a(C3a)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔淋巴血管內(nèi)皮細胞嗜肺軍團桿菌(LP)核酸檢測試劑盒   48T

綠膿桿菌(PA)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

綠膿桿菌(PA)核酸檢測試劑盒   48T

腸道病毒EV71核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。