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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔肺泡巨噬分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。肺泡由單層上皮細胞構成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經多次反復分枝成無數細支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞較易獲得，便于培養，并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養，難以長期生存。巨噬細胞(Macrophages)是一種位于組織內的白血球，源自單核細胞，而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞，在脊椎動物體內參與非特異性防衛(先天性免疫)和特異性防衛(細胞免疫)。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫細胞，令其對病原體作出反應。肺泡巨噬細胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活躍，有重要防御功能。肺泡是重要的巨噬細胞儲存器官，為結核病的研究提供了重要的材料。

方法簡介：

公司實驗室分離的兔肺泡巨噬采用機械研磨結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的兔肺泡巨噬經CD68免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 巨噬細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 （12mM）

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

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Humanai-neuroblastoma-aibody,NB-AbELISAKit 人抗神經母細胞瘤抗體(NB-Ab)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanEsogeeceptor,ER檢測試劑盒人雌激素受體(ER)檢測試劑盒規格：96T/48T

組織SPRK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

humanorosomucoid2,ORM2ELISAKit人類粘蛋白2(ORM2)檢測試劑盒規格：96T/48T

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PARP1重組人 PARP-1 / PARP 蛋白 Protein

IL3 Protein Human 重組人 IL3 / IL-3 蛋白

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TM(Thrombomodulin 0.5mgTM(Thrombomodulin) 血栓調節蛋白多肽

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HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

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豚鼠甘油-3-0酸脫氫酶(GAPDH)檢測試劑盒 ，英文名： GAPDH ELISA Kit

Human paraoxonase (PON) ELISA Kit 人酶(PON)檢測試劑盒

RabbitProgesterone,PROGELISAKit 兔子孕激素/孕酮(PROG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBF(HumanfactorB)ELISAKit人B因子

細菌糖酵解溴百里酚藍(BTB)檢測試劑盒20次

rabbitiercellularadhesionmolecule2,ICAM-2ELISAKit兔子細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)檢測試劑盒規格：96T/48T

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人轉錄激活因子6(ATF6)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human ATF6 (Activating anscription Factor 6) ELISA Kit

人腺苷三0酸結合盒轉運體G1(ABCG1)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human ABCG1 (ATP Binding Cassette anspoer G1) ELISA Kit

人腺苷三0酸結合盒轉運體A1(ABCA1)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human ABCA1(ATP Binding Cassette anspoer A1) ELISA Kit