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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

人皮層神經(jīng)元分離自腦皮層組織；皮層神經(jīng)元細(xì)胞是構(gòu)成中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長突觸(軸突)的細(xì)胞，它由細(xì)胞體和細(xì)胞突起構(gòu)成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經(jīng)纖維，它的末端的細(xì)小分支叫做神經(jīng)末梢。細(xì)胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中，細(xì)胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細(xì)胞體是細(xì)胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細(xì)胞中央，染色質(zhì)少，核仁明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì)，還有許多神經(jīng)元纖維。細(xì)胞突起是由細(xì)胞體延伸出來的細(xì)長部分，又可分為樹突和軸突。每個(gè)神經(jīng)元可以有一或多個(gè)樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細(xì)胞體。每個(gè)神經(jīng)元只有一個(gè)軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個(gè)神經(jīng)元或其他組織，如肌肉或腺體。皮質(zhì)神經(jīng)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細(xì)胞之一，是大腦進(jìn)行功能活動(dòng)調(diào)節(jié)的基本單位，參與動(dòng)物多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。通過形態(tài)學(xué)觀察顯示神經(jīng)元從貼壁、伸出突起開始；突起逐漸增多，而后突起進(jìn)一步增多并逐漸成網(wǎng)，同時(shí)細(xì)胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細(xì)胞為豐滿，隨后神經(jīng)元開始裂解，突起逐漸減少，細(xì)胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細(xì)胞變形。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人皮層神經(jīng)元采用消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人皮層神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)ELISA 試劑盒

Human ansforming growth factor beta 1 (TGF- beta 1) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)檢測試劑盒

HumansolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit 人可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanIerleukin10,IL-10檢測試劑盒人白介素10(IL-10)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織抗壞血酸比色法定量檢測試劑盒20次

Humanisletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit人胰島淀粉樣多肽(IAPP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PACAP(1-38 Peptide 0.5mgPACAP(1-38 Peptide) 腺苷酸環(huán)化酶激活肽 1-38(全蛋白)

CD97重組人 CD97 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ITGA5 & ITGB6 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 蛋白

ACVR2B Protein Human 重組人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PACAP(1-38 Peptide 0.5mgPACAP(1-38 Peptide) 腺苷酸環(huán)化酶激活肽 1-38(全蛋白)

ITGA5 & ITGB6 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ACVR2B Protein Human 重組人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CD97重組人 CD97 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

豚鼠白介素1β(IL1β)檢測試劑盒 ，英文名： IL1β ELISA Kit

Human cholyglycine (CG) ELISA Kit 人甘膽酸(CG)檢測試劑盒

rabbitLeptin,LEPELISAKit 兔子瘦素(LEP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAELISAKit大鼠抗受體

線粒體復(fù)合物III蛋白免疫共沉淀分析試劑盒5次

Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISAKit兔抗糖蛋白抗體(GP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人皮層神經(jīng)元細(xì)胞人早期生長應(yīng)答蛋白1(EGR1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human EGR1 (Early Growth Response Protein 1) ELISA Kit

人早期生長應(yīng)答蛋白2(EGR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human EGR2 (Early Growth Response Protein 2) ELISA Kit

人早期生長應(yīng)答蛋白3(EGR3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human EGR3 (Early Growth Response Protein 3) ELISA Kit

人早期生長應(yīng)答蛋白4(EGR4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human EGR4 (Early Growth Response Protein 4) ELISA Kit