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實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠多巴胺神經元分離腦組織；多巴胺神經元，即：胺能神經元，主要指含多巴胺的神經元，其細胞體主要分布在黑質、腳間核和丘腦下部等處。在這些區域多巴胺含量很高。多巴胺在機體內合成時以酪為原料。腦內的多巴胺主要是由黑質細胞來合成，這些多巴胺參與錐體外系統的活動，與軀體運動機能有密切關系。腦內多巴胺代謝失常時，可引起震顫性麻痹(帕金森震顫)。多巴胺(Dopamine)，是NA的前體物質，是下丘腦和腦垂體腺中的一種關鍵神經遞質，中樞神經系統中多巴胺的濃度受精神因素的影響，神經末梢的GnRH和多巴胺間存在著軸突聯系并相互作用，以及多巴胺有抑制GnRH分泌的作用。中腦的神經原物質多巴胺(Dopamine)，則直接影響人們的情緒。從理論上來看，增加這種物質，就能讓人興奮，但是它會令人上癮。多巴胺在前腦和基底神經節(Basal Ganglia)出現，基底神經節負責處理恐懼的情緒，但由于多巴胺的緣故，取代了恐懼的感覺，因此有很多人的上癮行為，都是因多巴胺而起的。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠多巴胺神經元采用消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠多巴胺神經元經TH免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 神經元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)檢測試劑盒 ，英文名： PPAR-γ ELISA Kit

Rabbit angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 兔血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)檢測試劑盒

腸道病毒通用型(EV-U)核酸檢測試劑盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMN(Humanmetanephrine)ELISAKit人變

體液基質金屬蛋白酶125I同位素標記檢測試劑盒20次

ELISAKitISR-β犬胰島素受體β

IL4重組狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白 Protein

Oct-4(Octamer-4 0.5mgOct-4(Octamer-4) 胚胎干細胞關鍵蛋白抗原

NLGN1重組人 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白 Protein

CARTPT Protein Human 重組人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 標簽)

GPC3 Protein Mouse 重組小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白

Oct-4(Octamer-4 0.5mgOct-4(Octamer-4) 胚胎干細胞關鍵蛋白抗原

CARTPT Protein Human 重組人 CART / CARTPT 蛋白 (Fc 標簽)

IL4重組狗 IL4 / Interleukin-4 蛋白 Protein

GPC3 Protein Mouse 重組小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 蛋白

NLGN1重組人 Neuroligin 1 / NLGN1 蛋白 Protein

小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai mouse aibody (HAMA) ELISA Kit 人抗鼠抗體(HAMA)檢測試劑盒

Human20-hydroxyeicosateaenoicacid,12-HETEELISAKit 人12羥二十烷四烯酸(12-HETE)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACE(MouseAngiotensinconveingenzyme)ELISAKit小鼠血管緊張素轉化酶

藥品甘素(dulcin)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

Mouseperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測試劑盒規格：96T/48T

大鼠多巴胺神經元細胞鴨子酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名稱   方法   規格

鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

雞17羥皮質類固醇(17-OHCS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T