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產(chǎn)品名稱:Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549

產(chǎn)品特點:了解更多Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549運(yùn)輸,相關(guān)資料如:說明書、培養(yǎng)條件、注意事項及售后可咨詢我們在線客服。收到細(xì)胞后請盡快更換為含10% FBS的新鮮培養(yǎng)基,不建議使用原瓶中運(yùn)輸用培養(yǎng)基。

產(chǎn)品型號:

更新日期:2019-01-25

訪問次數(shù):794

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549的詳細(xì)資料:


本公司代理ATCC細(xì)胞,提供Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549運(yùn)輸售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細(xì)的說明書或價格信息,點擊了解更多腫瘤細(xì)胞
細(xì)胞名稱  Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549運(yùn)輸
形態(tài)特性 上皮樣

生長特性 貼壁生長

特征特性 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Puromycin,經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆,經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白,可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS;2ug/ml Puromycin

傳代方法 1:2~1:4傳代;每周2~3次。

傳代情況 C3

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FB飥#

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549運(yùn)輸在運(yùn)輸?shù)倪^程中,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,因此客戶在收到貨以后的*時間是要先觀察產(chǎn)品的狀況,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時,請不要立即打開培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱過夜,并于次日在顯微鏡下觀察,此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞仍不能貼壁,請試著用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺盼藍(lán)染色證實細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理;如若證實細(xì)胞無活力,請在收到貨后48小時內(nèi)將細(xì)胞狀態(tài)反饋給我公司,我們將盡快幫助解決。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549運(yùn)輸培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項:
1.收到Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549運(yùn)輸后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)絡(luò)。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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250克Azide Dextrose Broth疊氮鈉葡萄糖肉湯

100克KF Streptococcus AgarKF鏈球菌瓊脂

250克EVA BrothEVA肉湯

250克LIM Medium賴氨酸吲哚動力培養(yǎng)基

250克BETA-SSA AgarBETA-SSA瓊脂

250克Trypticase Soy Sheep Blood Agar Base胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)

250克V-P Medium Modified改良V-P培養(yǎng)基

250克R-2A AgarR2A瓊脂

TEM7R/Plxdc2  腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記相關(guān)蛋白質(zhì)7抗體   規(guī)格 0.2ml*

TEM1/CD248  內(nèi)涎蛋白/內(nèi)皮唾液酸蛋白抗體   規(guī)格 0.2ml*

Telomerase Binding Protein, P23  端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體   規(guī)格 0.1ml*

TEF4/TEA domain family member 2  轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF4抗體   規(guī)格 0.2ml*

TEF3/TEAD4  轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體   規(guī)格 0.2ml*

TECTB  遺傳性耳聾β-tectorin抗體   規(guī)格 0.2ml*

TdT/DNTT  末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶抗體   規(guī)格 0.2ml*

TDRD9/HIG1  缺氧誘導(dǎo)蛋白HIG1抗體   規(guī)格 0.2ml*

TDP-43  Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗體   規(guī)格 0.1ml*

TCTP  翻譯控制腫瘤蛋白抗體   規(guī)格 0.1ml*

TCRG  T細(xì)胞受體γ抗體   規(guī)格 0.2ml*

TCN2/Transcobalamin II  轉(zhuǎn)鈷胺素蛋白2抗體   規(guī)格 0.2ml*
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞;231-Cas9-549運(yùn)輸Mouse Anti-rabbit IgG/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.3ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/HRP  辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.5ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.3ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG   規(guī)格 0.1ml*

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