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細胞簡介：

食管癌是常見的六大惡性腫瘤之一，而我國是高發(fā)區(qū)之一。食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤。細胞主要呈多角形，大小不等，胞漿豐富，胞核呈圓形或卵圓形，大小不等。此外，有研究表明，大部分來自于上皮的腫瘤細胞中均存在角蛋白。體外分離和培養(yǎng)食管癌細胞，為研究食管癌生物學特性、癌變機理等奠定了實驗基礎。

細胞特性：

1）細胞來源于人食管癌組織。

2)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

3)細胞生長方式：多角形，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代腫瘤細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠巨噬細胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA 試劑盒

Rat ai myocardial aibody (AMA) ELISA Kit 大鼠抗心肌抗體(AMA)檢測試劑盒

HumanMannmabindingprotein/mannanbindinglectin,MBP/MBLELISAKit 人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBP/MBL)檢測試劑盒 進口分裝

Humanai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgA檢測試劑盒人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)檢測試劑盒

植物果糖-1,6-二0酸縮酶(ALD)定量檢測試劑盒20次

Humanβai-galactanproteinsIgGELISAKit人β乳糖蛋白抗體IgG檢測試劑盒

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CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白

PDGF-BB peptide 血小板源性生長因子-BB抗原 0.5mgPDGF-BB peptide 血小板源性生長因子-BB抗原

AGA Protein Human 重組人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 (His 標簽)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein

CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白

IFNAR2重組人 IFNAR2 / IFNABR 蛋白  Protein

豬Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢ)ELISA 試劑盒

Human ai hepatitis D virus aibody (ai-HDV) ELISA Kit 人抗丁型肝病毒抗體(ai-HDV)檢測試劑盒

PorcineTestoterone,TELISAKit 豬(T)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitfora-GluELISAKit大鼠α葡萄糖苷酶

血液比色法定量檢測試劑盒

Mouseansferrieceptor,TFRELISAKit小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒

人食管癌細胞植物硝態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

土壤銨態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

土壤硝態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

植物態(tài)氮測試盒   可見分光光度法   50管/48樣