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細胞簡介：

小腸位于腹中，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場所。一般根據(jù)形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化將小腸分為三段，分別為十二指腸，空腸和回腸。小腸壁結(jié)構(gòu)一般分 4層，由外向內(nèi)依次為：漿膜層，平滑肌層，粘膜下層和粘膜層。粘膜層又分為3層：靠近粘膜下層的是一層平滑肌，稱為粘膜肌層。其次為結(jié)締組織，又稱為固有層。后面向腸腔的是一層柱狀上皮細胞構(gòu)成的粘膜。

成纖維細胞是結(jié)締組織中常見的細胞，電鏡下，成纖維細胞胞質(zhì)內(nèi)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和高爾基復(fù)合體，表明其具有合成和分泌蛋白質(zhì)的功能。己知成纖維細胞的主要功能之一是合成膠原蛋白及其他細胞外基質(zhì)，在組織器官纖維化過程中發(fā)揮重要作用。

細胞特性：

1）細胞來源于手術(shù)切除的正常小腸組織。

2)細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：成纖維樣細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Sirt1ELISAKit

田鼠睪酮(T)elisa分析檢測試劑盒

T ELISA kit

人白介素26(IL-26)elisa分析檢測試劑盒

IL-26ELISAKit

石蠟切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒

綿羊elisa檢測試劑盒

乙醇酸含量試劑盒

小鼠精/絲豐富剪接因子4(SRSF4)elisa檢測試劑盒

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5+6抗體

LRP5 + LRP6

腦蛋白44抗體

BRP44

可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白3A1抗體  Anti-SLCO3A1/OATP-D

環(huán)指蛋白32抗體  Anti-RNF32

神經(jīng)肽Y受體5抗體  Anti-NPY5R

鋅指蛋白852抗體  Anti-ZNF852

精子發(fā)生相關(guān)蛋白7抗體

SPATA7

晶狀體蛋白γ4抗體

CRYGD

絲/精相關(guān)核基質(zhì)蛋白3抗體  Anti-SRRM3

磷酸化蛋白磷酸酶2抗體  Anti-Phospho-PTPN11/SHP2 (Tyr477)

蛋白Z抗體  Anti-Protein Z

生精細胞凋亡相關(guān)基因3抗體  Anti-TSARG3/TSARG1

羅丹明標(biāo)記豚鼠IgM

鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白21抗體

KCTD21

腦血管內(nèi)皮細胞粘附分子1抗體

人小腸成纖維細胞CEECAM1