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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

室管膜是覆蓋在各腦室、中腦水管、脊髓中央管腔面的上皮，由一層立方形、柱狀或扁平上皮細(xì)胞構(gòu)成，來源于胚胎時期神經(jīng)管的室管膜層，是胚胎神經(jīng)上皮的遺留物。

神經(jīng)干細(xì)胞是存在于哺乳動物體內(nèi)的一種具有多向分化潛能和自我更新能力的細(xì)胞，能分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，其在神經(jīng)系統(tǒng)中的替代前景廣闊。

細(xì)胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常腦或脊髓組織。

2）細(xì)胞鑒定：Nestin熒光染色為陽性。

3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細(xì)胞生長方式：集落，克隆球狀，半貼壁半懸浮培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人總抗氧化能力( T-AOC) ELISA 試劑盒

Rat adiponectin (ADP) ELISA Kit 大鼠脂聯(lián)素(ADP)檢測試劑盒

HumanGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISAKit 人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanheparinassociatedaibody,HIT檢測試劑盒人抗肝素PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體(HIT)檢測試劑盒

組織肝脂酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

humanmajorvaultprotein,MVPELISAKit人主要穹窿蛋白(MVP)檢測試劑盒

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta 0.5mgRAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 維受體-β抗原

KLK7重組人 KLK7 / PRSS6 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ALPP Protein Human 重組人 Alkaline phosphatase / ALPP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FN1 Protein Human 重組人 Fibronectin / Fibronectin Fragment 2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta 0.5mgRAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta) 維受體-β抗原

ALPP Protein Human 重組人 Alkaline phosphatase / ALPP 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FN1 Protein Human 重組人 Fibronectin / Fibronectin Fragment 2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

KLK7重組人 KLK7 / PRSS6 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

豬單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA 試劑盒

Human macrophage derived chemokine (MDC/CCL22) ELISA Kit 人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)檢測試劑盒

PorcineSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 豬超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha1-AGP(MouseAlpha1-Acidglycoprotein)ELISAKit小鼠α1酸性糖蛋白

血液0酸二酯酶2(PDE2)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試劑盒10次

Mouseβ-catenin,β-catELISAKit小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)檢測試劑盒

兔室管膜細(xì)胞豬C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。